液相色谱仪检测器主要包括以下几种类型:
紫外-可见光检测器(UV/Vis):这种检测器利用样品中吸收紫外光的特性进行检测和定量分析,适用于各种有色或无色物质,具有灵敏度高、可靠性强等优点。
光电二极管阵列检测器(DAD检测器):实际上是紫外检测器的一种,可以进行全波长检测,实现3D光谱分析。虽然使用量不大,但由于其关键技术尚未被广泛掌握,制造成本较高,检测限略低于紫外检测器。
荧光检测器:这种检测器适用于能激发荧光的化合物,尤其是在生物样品痕量分析中具有重要作用。荧光检测器在实验过程中需要注意脱气,以避免系统残留的氧气引发的荧光淬灭反应。
示差折光检测器(RID或CD):这种检测器测定柱后流出液的总体物理性质的变化,如折射率和电导率。由于其灵敏度较低且对温度和流量波动较为敏感,不适用于痕量分析和梯度洗脱。
蒸发光散射检测器:这是一种通用检测器,适用于梯度洗脱检测,但灵敏度和重复性不如其他检测器。
电喷雾检测器:虽然现在还不算非常成熟,但它提供了一种新的检测方式,具有较高的灵敏度,适合梯度洗脱检测。
电化学检测器:包括脉冲伏安检测器、电导检测器、电位检测器等,这些检测器利用电化学方法测量样品电化学反应,适用于样品中含有金属离子和有机离子的检测与分析。2
质谱检测器:这是液相色谱仪中应用最广泛的高灵敏度检测器之一,能够对样品中的分子进行结构鉴定、1)紫外吸收检测器 紫外吸收检测器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长,并安装一个光栅型单色器,其波长选择范围宽(190nm~800nm)。它有两个流通池,一个作参比,一个作测量用,光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池都通过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接受到的辐射强度相等,无信号输出。当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号大小与组分浓度有关。 局限:流动相的选择受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相,每种溶剂都有截止波长,当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时,溶剂的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。 (2)光电二极管阵列检测器(photodiode array detector, PDAD) 也称快速扫描紫外可见分光检测器,是一种新型的光吸收式检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件,构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号,然后对二极管阵列快速扫描采集数据,得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据,从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。 单光束二极管阵列检测器,光源发出的光先通过检测池,透射光由全息光栅色散成多色光,射到阵列元件上,使所有波长的光在接收器上同时被检测。阵列式接收器上的光信号用电子学的方法快速扫描提取出来,每幅图象仅需要10ms,远远超过色谱流出峰的速度,因此可随峰扫描。
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荧光检测器
荧光检测器(fluorescence detector, FD) 是一种高灵敏度、有选择性的检测器,可检测能产生荧光的化合物。某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物,再进行荧光检测。其最小检测浓度可达0.1ng/ml,适用于痕量分析;一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级,但其线性范围不如紫外检测器宽。 近年来,采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比,因而具有很高的灵敏度,在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。
高效液相色谱仪的光学类检测器:
高效液相色谱仪的紫外吸收检测器广泛用于高效液相色谱,它需要对所测试的样品组分进行UV吸收,并且是选择性检测器。
高效液相色谱仪的二极管阵列探测器(DAD)是20世纪80年代出现的一种光学多通道探测器,扫描各洗脱组分的色谱图,经计算机处理,得到了色谱图与色谱图相结合的三维图谱。吸收光谱用于定性分析(以确定其是否为单一纯物质),色谱用于定量分析,并常用于复杂样品(如生物样品、中草药)的定性和定量分析。
荧光检测器也是一种高灵敏度的选择性检测器。常用的高效液相色谱(HPLC)检测器也被广泛使用,仅次于紫外吸收检测器。它适用于刺激荧光的化合物。许多生命科学相关的物质,如氨基酸、胺类、维生素、类固醇和一些代谢药物,都可以通过荧光检测到。荧光检测器可用于生物样品的微量分析,特别是经荧光衍生后,可检测出极少量的氨基酸和多肽。
高效液相色谱仪的通用型检测器:
高效液相色谱仪的差示折射率检测器是一种通用类型的检测器,只要测量组分的折射率不同于洗脱液的折射率,就可以使用它。生命科学中经常遇到所有类型的碳水化合物,并且没有紫外线吸收。通常使用差示折射率检测器。它的多功能性大于UVD,但其灵敏度低,对温度变化敏感,与梯度洗脱不相容,限制了其应用。
高效液相色谱仪的蒸发光散射检测器(ELSD)也是一种多功能的检测器,它可以检测任何比流动相波动性小的样品,而不需要含有发色团的样品。蒸发光散射探测器的响应与样品的质量成正比。它可用于测定样品的纯度或检测未知样品。蒸发光散射检测器比折射率检测器更灵敏,对温度变化不敏感,具有稳定的梯度洗脱基线。
高效液相色谱仪的质谱检测器是另一种通用的检测器,它具有灵敏度高、选择性强、通用性强等优点,能够提供化合物的分子量和结构信息。然而,它昂贵的操作成本和复杂性限制了它的应用。
紫外可见检测器灵敏度高,线性范围宽,对流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱分离。该检测器要求被检测样品组分有紫外-可见光吸收,而使用的流动相无吸收,或在被测组分吸收波长处无吸收。一般选择在待分析物最大吸收波长处进行检测,以获得最高灵敏度和抗干扰能力。在没有最大吸收时,可采用末端吸收。检测波长的选择除取决于待测物质的成分和分子结构外,还必须考虑流动相组成、共存组分干扰等因素。特别是各种溶剂都有一定的透过波长下限值,超过这个波长,溶剂的吸收会变得很强,以至于不能很好地测出待测物质的吸收强度。
2、光电二极管阵列检测器(Photodiode Array Detector)
简称PDA,又称为二极管阵列检测器(DAD)。这种检测器以光电二极管阵列作为检测元件,可进行多通道并行检测,在一次色谱测量中,可同时获得时间、波长、吸光度三者的关系,通过计算机处理,在荧光屏上显示出三维图谱,也可作出任意波长的吸光度-时间曲线和任意时间的吸光度-波长曲线。
3、示差折光检测器
示差折光检测器是一种通用型检测器。基于连续测定液相色谱色谱柱流出物光折射率的变化而用于测定溶质浓度,溶液的光折射率是溶剂流动相和溶质各自的折射率乘以其物质的量浓度之和,溶有样品的流动相和流动相本身之间光折射率之差即表示样品在流动相中浓度。
原则上,凡是与流动相光折射率有差别的样品都可用它来测定,其检测限可达(10^-6~10^-7)g/ml。应注意的是,选择溶剂时必须考虑溶剂的光折射率。但这种检测器灵敏度低,对温度、流动相组成等的变化敏感,而且与梯度洗脱不相容,很大程度地限制了它的应用范围。在药物分析中,这种检测器多用于多糖类、萜类化合物等分子量和含量的测定。
4、荧光检测器(Fluorescence Detector)
荧光检测器是基于化合物的光致发光现象,荧光检测器流通池为直角形的试样池,用石英材料制成。这一检测器特别适用于痕量组分和能显示荧光的物质检测。这种检测器具有极高的灵敏度和良好的选择性。一般来说,它比紫外吸收检测器的灵敏度要高10-1000倍,可达μg/L级,而且需要的试样很少,因此在药物和生化分析中有着广泛的应用。
5、蒸发光散射检测器(ELSD)
蒸发光散射检测器是一种新型的通用型质量检测器,不同于紫外和荧光检测器,ELSD的响应不依赖于样品的光学特性,任何挥发性低于流动相的样品均能被检测,不受其官能团的影响。ELSD检测过程主要分为三个步骤:首先是雾化过程,用惰性气体或净化空气将色谱柱流出物雾化;第二步是蒸发过程,流动相在加热管(漂移管)中蒸发;第三步是检测,测定留下来的样品颗粒的光散射。
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