高效液相色谱仪的维护与保养

　　一、检测器的维护和保养

　　1. 检测器是高效液相色谱仪器的数据收集部分，由很多的电子和光学元件组成。禁止拆卸更动仪器内部元件防止损坏或影响准确度。

　　2. 仪器内部的流通池是流动相流过的元件，样品的干净程度和微生物的生长都可能污染流通池，导致无法检测或检测结果不准，所以在使用了一段时间以后要先用水冲洗流通池和管路再换有机溶剂冲洗。

　　3. 当仪器检测数据出现明显波动，基线噪音变大时要冲洗仪器管路冲洗后如果还是没有改善就应该检测氘灯能量，如果能量不足就因更换新的氘灯。

　　4. 仪器在每次使用完了以后都要用水和一定浓度的有机溶剂冲洗管路，保证下次使用时管路和系统的清洁。

　　二、高压恒流泵的维护和保养

　　1. 高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。在升高流速的时候应梯度势升高，最好每次升高0.2ml/min当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。

　　2， 在仪器使用完了以后，要及时清晰管路冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。

　　三、色谱柱的维护和保养

　　1. 所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.45um薄膜过滤。而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。

　　2. 所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.45um水膜过滤后使用，所有试液均新用新配。并且在进样的样品都必须经过0.45um薄膜针筒过滤后进样。

　　3. 本公司检验项目中所使用到的最大流速为1.0ml/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。

　　4. 在仪器检测完了后，均使用水：甲醇=90：10清洗了管路和色谱柱1小时以上，使用水：甲醇=90：10保存管路和色谱柱40分钟以上。

　　高效液相色谱仪注意事项

　　液相色谱是指样品组分在柱填料和流动相之间进行的物质交换以达到分离的目的因此流动相要求具有以下特点：

　　纯度流动相在使用前必须使用高效液相色谱仪试剂和过滤器去除颗粒杂质和其他物质（用0.45um或更细的膜过滤）杂质在色谱柱上的积累将影响色谱柱的使用寿命。

　　溶解度样品的溶解度应适当。如果溶解度不好，样品会在柱头沉淀，不仅影响提纯分离，而且缩短柱的使用寿命。

　　低粘度（小于2cp）高粘度的溶剂会影响溶质的扩散传质，降低塔效，增加塔压降，延长分离时间。选择沸点低于100℃的流动相。

　　样品易于回收应选择挥发性溶剂。

　　当流动相pH值用于反相色谱分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，控制样品组分离解的技术，提高组分在固定相上的保留率和改善峰型被称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的K值就越大。当pH值远远低于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在，但对于弱碱性，相反是真实的分析弱酸样品时流动相通常加入少量弱酸一般为50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时流动相通常加入少量弱碱一般为50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。